Juan Bautista González López, pesquisador da Unidade de Biologia Molecular da Futureco Bioscience e cientista principal por trás do método certificado ISO 17025 para quantificação de esporos viáveis na NoFly, compartilha suas perspectivas sobre essa inovação. Esse avanço não apenas estabelece um novo padrão no controle de qualidade dos biofungicidas, mas também demonstra como tecnologias avançadas, como a contagem automatizada de partículas, podem transformar precisão, reprodutibilidade e conformidade regulatória em produtos microbianos para proteção de culturas.
Qual foi o maior desafio técnico que você encontrou ao desenvolver a tecnologia de contagem automática de partículas e como o resolveram?
O maior desafio foi a seleção e o uso do fluoróforo. Com poucas referências práticas, realizamos testes extensivos com uma ampla variedade de corantes e condições fluorescentes até que uma combinação confiável seja identificada. Também observamos que, em solução aquosa, os esporos NOFLY perdem gradualmente sua capacidade de coloração devido à redução da taxa metabólica dos esporos, tornando os tempos de solubilização e coloração críticos. Resolvemos isso otimizando a química dos corantes, o tempo de contato e o manuseio das amostras, garantindo que o método suporte um controle consistente de qualidade dos biofungicidas.
Alcançar a acreditação ISO 17025 é um processo rigoroso. Quais aspectos da validação do método foram mais críticos para obter a certificação e como ela difere das abordagens tradicionais de controle de qualidade dos biofungicidas?
A reprodutibilidade e repetibilidade entre analistas, dias e lotes foram decisivas. Os materiais biológicos são heterogêneos, e a variabilidade de lote para lote pode interferir na medição. Validamos precisão e exatidão usando materiais de referência certificados e múltiplos lotes de fabricação da NOFLY. O protocolo inclui pontos de controle pré-definidos com verificações rigorosas, e realizamos réplicas técnicas e duplicados para cada medição, garantindo robustez. Essa abordagem reforça um controle robusto de qualidade dos biofungicidas, superando os métodos tradicionais de contagem de placas.
O método foi comparado com materiais de referência certificados. Por que essa etapa foi importante e o que ela mostra sobre a precisão e confiabilidade dos seus resultados?
Uma comparação inicial mostrou que nosso método automatizado consistentemente forneceu leituras ligeiramente superiores às das unidades formadoras de colônias (CFUs), o que é esperado quando as colônias se fundem durante o crescimento. Por esse motivo, validamos com um material de referência certificado (CRM) cujo valor pode ser rastreado por padrões internacionais. Como não há CRM para esporos de Cordyceps ou outros fungos entomopatogênicos, usamos Candida albicans de tamanho e formato semelhantes. As análises repetidas por diferentes analistas e sob condições variadas produziram valores de recuperação próximos a 100%, evidenciando precisão. Também testamos o NOFLY dentro de sua matriz de formulação, confirmando precisão e reprodutibilidade em condições reais do produto, fatores críticos no controle de qualidade dos biofungicidas.
Essa tecnologia tem potencial para ser aplicada a outros tipos de formulações microbianas? Quais são seus planos para o futuro?
Sim. A abordagem quantifica células viáveis de leveduras esféricas e fúngicas. Embora a validação atual cubra